Cell Cycle Analysis - Mitotic Cells in HeLa Cultures
Klassifizierung von Zellzyklusstadien in HeLa-Zellen mittels morphologiebasierter Analyse mit ausschließlich standardmäßiger Kernfärbung. Dieser Datensatz demonstriert die Identifikation von Zellzyklusphasen (G0/G1, S/G2, M) anhand der Kernmorphologie ohne spezialisierte Farbstoffe. Aus insgesamt ~5.500 Zellen wurden durch sequentielles Gating basierend auf Kerneigenschaften erfolgreich 164 mitotische Zellen (3 %) isoliert.
Methodik
HeLa-Zellen wurden in 8-Well-ibidi-Objektträgern kultiviert und mit 4 % PFA für 15 min fixiert. Die Zellen wurden mit Hoechst 33342 (Kernfärbung) und Phalloidin-Alexa Fluor 488 (Aktin-Zytoskelett) gefärbt. Die Bilder wurden mit einem Nikon-TI2-Weitfeldmikroskop mit DIC aufgenommen.
Anwendungsbeispiele
Complex cell cycle analysis without specialized dyes (e.g., EdU, BrdU). Retrospective analysis of existing datasets. Sequential gating to isolate mitotic cells with high purity. Morphological profiling of cell cycle stages.
Technische Hinweise
Key morphological features used: Area, Circularity, Mean DAPI Intensity, Major Axis Length, Minor Axis Length. Final gating based on nuclear elongation (Major vs. Minor Axis Length) was critical for removing contaminating interphase cells. Distribution: G0/G1 (65%), S/G2 (23%), Mitosis (3%), Other/Debris (9%).
Assays in diesem Datensatz
Cell Morphology & Phenotypic Profiling
Zellmorphologie & phänotypisches Profiling
Misst Größe, Form und Fluoreszenzintensität einzelner Zellen über mehrere Marker hinweg.
Cell Growth, Survival & Fitness
Zellzählung & Vitalität
Zählt die Gesamtzahl der Zellen und klassifiziert sie anhand der Markerintensität als lebend oder tot und liefert damit den grundlegendsten Messwert für Toxizitäts- und Dosis-Wirkungs-Experimente.
Cell Growth, Survival & Fitness
Zellzyklus-Analyse
Kategorisiert Zellen anhand von Zellmorphologie und DNA-Färbeintensität in die Phasen G0/G1, S/G2 und M und bewahrt dabei – anders als die Durchflusszytometrie – den räumlichen Kontext.
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