Lysosomale pH-Aktivität in FaDu- und HGFb-Zellen
Eine 4-Kanal-Konfokalaufnahme von FaDu- und HGFb-Zellen, die mit Autophagie-Modulatoren behandelt wurden. Autophagosomen tragen ein Tandem-TagRFP/Emerald-GFP-Label (das GFP wird unterhalb von pH 6 gequencht, während TagRFP stabil bleibt) und Lysosomen sind mit LysoTracker markiert, was einen ratiometrischen Auslesewert der Azidität ergibt. Cytely segmentiert Lysosomen und ermittelt die Lysosomenzahl pro Zelle über verschiedene Wirkstoff-Behandlungsgruppen hinweg, darunter Bafilomycin und BEZ.
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Methodik
4-Kanal-Konfokal-Z-Stacks. Ch1: TagRFP (säureunempfindlich); Ch2: Durchlicht; Ch3: Emerald GFP (säureempfindlich, wird unterhalb von pH 6 gequencht); Ch4: LysoTracker (säureempfindlich, markiert saure Lysosomen). Der Vergleich der säureempfindlichen und säureunempfindlichen Kanäle liefert einen ratiometrischen Auslesewert der lysosomalen/autolysosomalen Azidität.
Namensnennung
Balvan, Jan; Navratil, Jiri (2022). Autophagosomal/autolysosomal/lysosomal dynamics of FaDu and HGFb cells affected by autophagy modulators (dataset of dual labeling of autophagosomes and labeling lysosomes, confocal microscopy) [Data set]. Zenodo. https://doi.org/10.5281/zenodo.7116549 License: CC BY 4.0. Relevant paper: Hanelova K, Raudenska M, Kratochvilova M, Navratil J, Vicar T, Bugajova M, Gumulec J, Masarik M, Balvan J. Autophagy modulators influence the content of important signalling molecules in PS-positive extracellular vesicles. Cell Communication and Signaling. 2023;21(1):120. doi: 10.1186/s12964-023-01126-z.
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