Personne ne publie d'article sur l'efficacité de la transfection. Personne ne décroche de subvention pour cela. Pourtant, chaque expérience CRISPR, chaque étude de surexpression, chaque production de vecteur viral…
Personne ne publie d'article sur l'efficacité de transfection. Personne n'obtient de financement pour cela. Pourtant, chaque expérience CRISPR, chaque étude de surexpression, chaque production de vecteurs viraux en dépend. Si votre transfection atteint 5 % alors qu'il vous fallait 30 %, vous venez de perdre une semaine de travail en aval et des milliers d'euros de réactifs.
Le plus cruel : bien souvent, vous ne vous en rendez compte que des jours plus tard, lorsque l'expérience échoue pour des raisons qui remontent à une mauvaise transfection que vous n'avez jamais vérifiée. La solution est d'une simplicité enfantine : imager la plaque, compter les cellules positives, calculer le pourcentage. Mais « d'une simplicité enfantine » prend quand même du temps lorsque vous évaluez à l'œil plusieurs puits, et c'est pire lorsque vous avez besoin des taux de doubles positives pour une co-transfection.
Cytely vous donne les pourcentages de simples et de doubles positives en quelques minutes. Importez vos images DAPI + rapporteur, fenêtrez sur l'intensité, et vous obtenez un chiffre solide. Pour les doubles plasmides, Cytely croise les fenêtres des deux canaux pour vous indiquer exactement combien de cellules ont reçu les deux constructions, le chiffre qui compte vraiment pour votre expérience en aval.
Déroulement du test
Segmenter les noyaux à partir du DAPI → mesurer l'intensité du canal rapporteur par cellule → classer transfecté/non transfecté par fenêtrage d'intensité. Pour la co-transfection : fenêtrer chaque canal rapporteur afin d'identifier les populations simples- et multi-positives.
Ce que vous fournissez
- Ch1 : DAPI
- Ch2 : rapporteur fluorescent du plasmide A (par exemple GFP)
- Ch3+ : canaux de rapporteurs supplémentaires (par exemple mCherry, BFP)
Ce que vous obtenez
- % de cellules transfectées (simples, doubles ou multiples positives)
- Intensité du rapporteur par cellule
- Nombre total de cellules
Prêt à l'emploi
Plasmide unique, co-transfection multi-plasmidique (2 constructions ou plus), efficacité de transduction virale, toute construction rapporteuse fluorescente.
Sur demande
Discrimination entre expression transitoire et stable.