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En 1882, Élie Metchnikoff enfonça une épine de rose dans une larve d'étoile de mer et observa des cellules affluer pour l'engloutir. Cette observation, des cellules qui dévorent des objets étrangers, est devenue l'un des fondements de l'immunité innée et lui a valu le prix Nobel en 1908.

Pendant plus d'un siècle, la phagocytose est restée un classique des manuels d'immunologie : importante, fondamentale et abondamment étudiée. Puis l'immuno-oncologie a changé la donne. Les cellules tumorales se protègent en affichant des signaux « ne me mange pas », le plus célèbre étant CD47. Une nouvelle génération de thérapies, dont les approches anti-CD47, anti-SIRPα et anti-CD24, vise à bloquer ces signaux et à permettre de nouveau aux macrophages d'engloutir les cellules cancéreuses. Soudain, l'un des plus anciens mécanismes immunitaires est devenu l'une des mesures les plus recherchées en découverte de médicaments.

Le test est simple sur le principe : mélanger des phagocytes avec des proies marquées par fluorescence, les imager et quantifier l'interaction. Mais l'analyse est plus difficile qu'il n'y paraît. La phagocytose exige de compter des objets discrets à l'intérieur d'autres objets : des particules-proies associées à des phagocytes. Un macrophage associé à huit bactéries est biologiquement très différent d'un macrophage associé à une seule, mais un lecteur de plaques peut les déclarer tous deux simplement « positifs ». La fluorescence globale réduit cette distribution à un seul chiffre et masque la biologie.

Cytely segmente les phagocytes, détecte les particules-proies comme sous-objets dans chaque cellule et rapporte le nombre de proies par phagocyte. Pas une mesure binaire positif/négatif, mais la véritable distribution à l'échelle de la cellule unique. Dans les tests où le statut d'internalisation compte, des colorants sensibles au pH comme le pHrodo peuvent aussi aider à distinguer les proies liées à la surface de celles réellement internalisées. La plateforme calcule également la multiplicité de proies dans l'image, ou iMOP, pour normaliser entre des puits où la densité de proies a varié.

Déroulement du test

Segmenter les phagocytes → détecter les particules-proies → mesurer le nombre, la surface et l'intensité des proies par phagocyte. L'internalisation peut être évaluée à l'aide d'un colorant sensible au pH (par exemple pHrodo, qui ne fluoresce qu'une fois internalisé) ou par estimation du chevauchement 3D. L'iMOP fournit une métrique de contrôle pour normaliser l'activité phagocytaire par rapport à la disponibilité des proies.

Ce que vous fournissez

  • Ch1 : DAPI
  • Ch2 : marqueur des phagocytes ou masque cellulaire
  • Ch3 : proies marquées (par exemple bactéries marquées au pHrodo, billes fluorescentes, synaptosomes)

Ce que vous obtenez

  • Nombre de proies par phagocyte
  • Surface totale des proies par cellule
  • % de cellules positives pour la phagocytose
  • Intensité des proies par cellule
  • Évaluation de l'internalisation (proies liées à la surface vs internalisées, via un marqueur ou une estimation 3D)
  • Multiplicité de proies dans l'image (iMOP — rapport proies/cellules estimé dans l'échantillon)

Prêt à l'emploi

Phagocytose par les macrophages, la microglie, les neutrophiles ou les monocytes/THP-1. Engloutissement à base de billes, bactérien, de synaptosomes, efférocytose (élimination de cellules apoptotiques marquées), phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP), tout test à proie marquée. Évaluation de l'internalisation via des colorants sensibles au pH ou estimation 3D.

Sur demande

Cinétique de phagocytose en cellules vivantes, suivi de la maturation des phagosomes.

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