Lysosomal pH Activity in FaDu and HGFb Cells
Acquisition confocale à 4 canaux de cellules FaDu et HGFb traitées avec des modulateurs de l'autophagie. Les autophagosomes portent un marqueur tandem TagRFP/Emerald-GFP (la GFP est éteinte en dessous de pH 6 tandis que la TagRFP reste stable) et les lysosomes sont marqués au LysoTracker, ce qui fournit une lecture ratiométrique de l'acidité. Cytely segmente les lysosomes et rapporte le nombre de lysosomes par cellule à travers les différents groupes de traitement médicamenteux, dont la Bafilomycine et le BEZ.
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Méthodologie
Z-stacks confocaux à 4 canaux. Canal 1 : TagRFP (insensible à l'acidité) ; canal 2 : lumière transmise ; canal 3 : Emerald GFP (sensible à l'acidité, éteinte en dessous de pH 6) ; canal 4 : LysoTracker (sensible à l'acidité, marque les lysosomes acides). La comparaison des canaux sensibles et insensibles à l'acidité fournit une lecture ratiométrique de l'acidité lysosomale/autolysosomale.
Attribution
Balvan, Jan; Navratil, Jiri (2022). Autophagosomal/autolysosomal/lysosomal dynamics of FaDu and HGFb cells affected by autophagy modulators (dataset of dual labeling of autophagosomes and labeling lysosomes, confocal microscopy) [Data set]. Zenodo. https://doi.org/10.5281/zenodo.7116549 License: CC BY 4.0. Relevant paper: Hanelova K, Raudenska M, Kratochvilova M, Navratil J, Vicar T, Bugajova M, Gumulec J, Masarik M, Balvan J. Autophagy modulators influence the content of important signalling molecules in PS-positive extracellular vesicles. Cell Communication and Signaling. 2023;21(1):120. doi: 10.1186/s12964-023-01126-z.
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