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El análisis de colocalización tiene un problema de reputación. Durante años, la práctica habitual consistía en fusionar los canales rojo y verde, buscar el amarillo y declarar que había colocalización. Este enfoque es subjetivo, sensible al brillo de la imagen y produce habitualmente resultados engañosos. Los revisores lo saben. Los editores lo saben. Y, sin embargo, persiste, porque hacerlo correctamente, calculando los coeficientes de Pearson y de Manders por célula, requiere herramientas que la mayoría de los científicos de laboratorio no tienen configuradas.

Cytely calcula la correlación de Pearson o los coeficientes de solapamiento M1/M2 de Manders dentro de cada célula, no por imagen. Esto es muy importante: un coeficiente por imagen promedia todas las células y oculta el hecho de que algunas células muestran una colocalización fuerte y otras ninguna. Los coeficientes por célula le ofrecen una distribución, la biología real.

Y si necesita más especificidad, puede restringir el análisis a un compartimento concreto (solo el núcleo o solo el citoplasma).

La unión a la diana (target engagement), es decir, demostrar que un fármaco alcanza su diana intracelular, suele basarse en la colocalización de un compuesto marcado con un marcador de la diana. Las imágenes subjetivas de "fusión en amarillo" no superan el escrutinio regulatorio. Los coeficientes de Pearson por célula con verificación vinculada a la imagen, sí.

Cómo se ejecuta el ensayo

Segmentar las células → calcular la correlación de Pearson y los coeficientes de Manders entre Ch2 y Ch3 dentro de cada célula. Opcionalmente, restringir el análisis a un compartimento específico (solo núcleo o solo citoplasma).

Lo que usted aporta

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: marcador A (IF o etiqueta fluorescente)
  • Ch3: marcador B (IF o etiqueta fluorescente)

Lo que obtiene

  • Coeficiente de correlación de Pearson por célula
  • Coeficientes de solapamiento M1/M2 de Manders por célula
  • % de células con colocalización positiva
  • Relaciones de intensidad entre canales por célula

Listo para ejecutar

Colocalización receptor-ligando (p. ej., EGFR + EGF), sitios de contacto entre orgánulos (p. ej., mitocondria-RE mediante MitoTracker + ER-Tracker), coactivación de vías (p. ej., fosfoproteína + proteína total), localización de la acumulación de fármaco (p. ej., compuesto + marcador lisosomal), colocalización específica de compartimento (solo nuclear, solo citoplasmática).

Consúltenos para obtener soporte

Colocalización basada en objetos (evaluación del solapamiento espacial punto a punto), análisis de la función de correlación cruzada, colocalización en 3D.

Explore el ensayo de Colocalización y coexpresión de proteínas →