Contar parásitos dentro de las células hospedadoras es una lectura fundamental en el descubrimiento de fármacos antiparasitarios. El porcentaje de células infectadas, los parásitos por célula o la intensidad de la señal del parásito se reducen todos a uno…
Contar los parásitos dentro de las células hospedadoras es una lectura clave en el descubrimiento de fármacos antiparasitarios. El porcentaje de células infectadas, los parásitos por célula o la intensidad de la señal del parásito se reducen a una sola métrica: la carga parasitaria por célula.
El reto técnico es definir dónde medir. Primero se necesita una máscara de los núcleos de la célula hospedadora, después una máscara citoplasmática; a continuación, hay que detectar los objetos parasitarios, asignar los parásitos a las células y medir los recuentos o las intensidades en cada compartimento. Es posible con herramientas generales, pero cada nuevo experimento requiere crear máscaras, asignar objetos y ajustar el flujo de análisis.
Cytely lo automatiza: segmenta los núcleos y el citoplasma de la célula hospedadora, detecta y asigna las señales del parásito a células individuales, mide el número y la intensidad de los parásitos por célula y calcula métricas de parásitos por célula. El resultado es una carga parasitaria por célula que puede representar frente a la dosis para construir curvas de infección/eliminación.
Cómo se ejecuta el ensayo
Segmentar las células hospedadoras a partir del canal del marcador celular → detectar los parásitos como puntos u objetos en el canal del parásito → asignar los parásitos a las células hospedadoras por contención espacial → contar y medir la carga parasitaria por célula hospedadora → clasificar infectadas frente a no infectadas mediante un umbral de recuento de parásitos.
Lo que usted aporta
- Ch1: DAPI (núcleos de la célula hospedadora y del parásito)
- Ch2: marcador de la célula hospedadora (p. ej., tinción del cuerpo celular o IF citoplasmática)
- Ch3: marcador específico del parásito (p. ej., IF antiparásito, parásito que expresa GFP o tinción específica del patógeno)
Lo que obtiene
- % de células infectadas por condición
- Número de parásitos por célula hospedadora
- Área total de parásitos por célula hospedadora
- Intensidad media del parásito por célula
- Número de células hospedadoras
Listo para ejecutar
Infección por protozoos intracelulares (p. ej., Toxoplasma, Leishmania, Plasmodium, Trypanosoma), parásitos marcados fluorescentemente o que expresan GFP, tinción por IF anti-parásito, cribado de fármacos para compuestos antiparasitarios, paneles de cotinción hospedador-patógeno.
Consúltenos para obtener soporte
Cinética de infección en célula viva, clasificación de la fase del ciclo de vida del parásito, seguimiento de la motilidad del parásito extracelular.