Lysosomal pH Activity in FaDu and HGFb Cells
Una adquisición confocal de 4 canales de células FaDu y HGFb tratadas con moduladores de la autofagia. Los autofagosomas portan un marcaje en tándem TagRFP/Emerald-GFP (la GFP se apaga por debajo de pH 6 mientras que TagRFP permanece estable) y los lisosomas se marcan con LysoTracker, lo que proporciona una lectura ratiométrica de la acidez. Cytely segmenta los lisosomas e informa el número de lisosomas por célula en los distintos grupos de tratamiento farmacológico, incluidos Bafilomicina y BEZ.
Véalo en acción
Vea cómo se analizó este conjunto de datos de principio a fin en Cytely.
Metodología
Z-stacks confocales de 4 canales. Ch1: TagRFP (insensible al ácido); Ch2: luz transmitida; Ch3: Emerald GFP (sensible al ácido, se apaga por debajo de pH 6); Ch4: LysoTracker (sensible al ácido, marca los lisosomas ácidos). La comparación de los canales sensibles e insensibles al ácido proporciona una lectura ratiométrica de la acidez lisosomal/autolisosomal.
Atribución
Balvan, Jan; Navratil, Jiri (2022). Autophagosomal/autolysosomal/lysosomal dynamics of FaDu and HGFb cells affected by autophagy modulators (dataset of dual labeling of autophagosomes and labeling lysosomes, confocal microscopy) [Data set]. Zenodo. https://doi.org/10.5281/zenodo.7116549 License: CC BY 4.0. Relevant paper: Hanelova K, Raudenska M, Kratochvilova M, Navratil J, Vicar T, Bugajova M, Gumulec J, Masarik M, Balvan J. Autophagy modulators influence the content of important signalling molecules in PS-positive extracellular vesicles. Cell Communication and Signaling. 2023;21(1):120. doi: 10.1186/s12964-023-01126-z.
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