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Die Kolokalisationsanalyse hat ein Imageproblem. Jahrelang bestand die gängige Praxis darin, den roten und den grünen Kanal zu überlagern, nach Gelb zu suchen und Kolokalisation zu erklären. Dieser Ansatz ist subjektiv, empfindlich gegenüber der Bildhelligkeit und liefert regelmäßig irreführende Ergebnisse. Gutachter wissen das. Herausgeber wissen das. Und doch hält er sich, weil eine korrekte Durchführung, also die Berechnung von Pearson- und Manders-Koeffizienten pro Zelle, Tools erfordert, die den meisten Laborwissenschaftlern nicht eingerichtet zur Verfügung stehen.

Cytely berechnet den Pearson-Korrelationskoeffizienten bzw. die Manders-Überlappungskoeffizienten M1/M2 innerhalb jeder Zelle, nicht pro Bild. Das ist enorm wichtig: Ein Koeffizient pro Bild mittelt über alle Zellen und verschleiert, dass manche Zellen eine starke Kolokalisation zeigen und andere gar keine. Koeffizienten pro Zelle liefern Ihnen eine Verteilung, die tatsächliche Biologie.

Und wenn Sie mehr Spezifität benötigen, können Sie die Analyse zusätzlich auf ein bestimmtes Kompartiment beschränken (nur Zellkern oder nur Zytoplasma).

Der Nachweis des Target Engagements, also dass ein Wirkstoff sein intrazelluläres Ziel erreicht, beruht häufig auf der Kolokalisation einer markierten Verbindung mit einem Zielmarker. Subjektive „Gelb-Overlay“-Bilder halten einer regulatorischen Prüfung nicht stand. Pearson-Koeffizienten pro Zelle mit bildverknüpfter Verifizierung schon.

So läuft der Assay ab

Zellen segmentieren → Pearson-Korrelation und Manders-Koeffizienten zwischen Ch2 und Ch3 innerhalb jeder Zelle berechnen. Optional die Analyse auf ein bestimmtes Kompartiment beschränken (nur Kern oder nur Zytoplasma).

Was Sie bereitstellen

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: Marker A (IF oder Fluoreszenz-Tag)
  • Ch3: Marker B (IF oder Fluoreszenz-Tag)

Was Sie erhalten

  • Pearson-Korrelationskoeffizient pro Zelle
  • Manders-Überlappungskoeffizienten M1/M2 pro Zelle
  • % Zellen mit positiver Kolokalisation
  • Kanalintensitätsverhältnisse pro Zelle

Einsatzbereit

Rezeptor-Liganden-Kolokalisation (z. B. EGFR + EGF), Organellen-Kontaktstellen (z. B. Mitochondrien-ER über MitoTracker + ER-Tracker), Signalweg-Ko-Aktivierung (z. B. Phospho-Protein + Gesamtprotein), Wirkstoffakkumulations-Lokalisation (z. B. Verbindung + lysosomaler Marker), kompartimentspezifische Kolokalisation (nur nukleär, nur zytoplasmatisch).

Für Unterstützung anfragen

Objektbasierte Kolokalisation (Spot-zu-Spot-Bewertung der räumlichen Überlappung), Kreuzkorrelationsfunktionsanalyse, 3D-Kolokalisation.

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