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1882 stach Élie Metschnikow einen Rosendorn in eine Seesternlarve und beobachtete, wie Zellen herbeiströmten, um ihn zu umschließen. Diese Beobachtung, dass Zellen Fremdkörper fressen, wurde zu einem Grundpfeiler der angeborenen Immunität und trug 1908 zu seinem Nobelpreis bei.

Über ein Jahrhundert lang war Phagozytose Lehrbuch-Immunologie. Wichtig, grundlegend und umfassend erforscht. Dann veränderte die Immunonkologie die Ausgangslage. Tumorzellen schützen sich, indem sie „Friss mich nicht“-Signale präsentieren, allen voran CD47. Eine neue Generation von Therapeutika, darunter Anti-CD47-, Anti-SIRPα- und Anti-CD24-Ansätze, zielt darauf ab, diese Signale zu blockieren und Makrophagen wieder zu befähigen, Krebszellen zu verschlingen. Plötzlich wurde einer der ältesten Immunmechanismen überhaupt zu einer der gefragtesten Messgrößen in der Wirkstoffforschung.

Der Assay ist konzeptionell einfach: Phagozyten mit fluoreszenzmarkierter Beute mischen, abbilden und die Interaktion quantifizieren. Die Analyse ist jedoch trügerisch schwierig. Phagozytose erfordert das Zählen diskreter Objekte innerhalb anderer Objekte: Beutepartikel, die mit Phagozyten assoziiert sind. Ein Makrophage mit acht assoziierten Bakterien unterscheidet sich biologisch stark von einem mit nur einem, doch ein Plattenlesegerät meldet womöglich beide einfach als „positiv“. Die Gesamtfluoreszenz reduziert diese Verteilung auf eine einzige Zahl und verbirgt die Biologie.

Cytely segmentiert Phagozyten, detektiert Beutepartikel als Subobjekte innerhalb jeder Zelle und gibt die Beuteanzahl pro Phagozyt aus. Keine binäre Positiv/Negativ-Auswertung, sondern die tatsächliche Einzelzellverteilung. In Assays, bei denen der Internalisierungsstatus wichtig ist, können pH-sensitive Farbstoffe wie pHrodo zusätzlich helfen, oberflächengebundene von tatsächlich internalisierter Beute zu unterscheiden. Die Plattform berechnet außerdem die Bild-Multiplizität der Beute (iMOP), um über Wells mit unterschiedlicher Beutedichte hinweg zu normalisieren.

So läuft der Assay ab

Phagozyten segmentieren → Zielpartikel detektieren → Anzahl, Fläche und Intensität der Zielpartikel pro Phagozyt messen. Die Internalisierung kann mit einem pH-sensitiven Farbstoff (z. B. pHrodo, der nur bei Internalisierung fluoresziert) oder durch Abschätzung der 3D-Überlappung bewertet werden. iMOP liefert eine Kontrollmetrik zur Normalisierung der phagozytischen Aktivität gegen die Verfügbarkeit der Zielpartikel.

Was Sie bereitstellen

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: Phagozytenmarker oder Zellmaske
  • Ch3: markierte Beute (z. B. pHrodo-markierte Bakterien, fluoreszierende Beads, Synaptosomen)

Was Sie erhalten

  • Beuteanzahl pro Phagozyt
  • Gesamte Beutefläche pro Zelle
  • % phagozytosepositive Zellen
  • Beuteintensität pro Zelle
  • Internalisierungsbewertung (oberflächengebundene vs. internalisierte Beute über Marker oder 3D-Schätzung)
  • Bild-Multiplizität der Beute (iMOP — geschätztes Verhältnis von Beute zu Zellen in der Probe)

Einsatzbereit

Phagozytose durch Makrophagen, Mikroglia, Neutrophile oder Monozyten/THP-1. Bead-basierte, bakterielle, Synaptosomen-Aufnahme, Efferozytose (Beseitigung markierter apoptotischer Zellen), antikörperabhängige zelluläre Phagozytose (ADCP), jeder Assay mit markierten Zielpartikeln. Internalisierungsbewertung über pH-sensitive Farbstoffe oder 3D-Abschätzung.

Für Unterstützung anfragen

Lebendzell-Phagozytosekinetik, Verfolgung der Phagosomenreifung.

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