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1998 entdeckten Rogakou, Pilch, Orr und Bonner, dass jeder DNA-Doppelstrangbruch eine Phosphorylierung des Histons H2AX auslöst und dadurch am Schadensort einen sichtbaren Focus erzeugt. Ein Focus entspricht einem Bruch. Er ist bis heute der empfindlichste bekannte DNA-Schadensmarker, der Schäden bis in den Milligray-Bereich erfasst und damit um Größenordnungen empfindlicher ist als der Comet-Assay.

Und doch erfolgt die Foci-Zählung noch immer weitgehend manuell. In Publikationen wird regelmäßig beschrieben, wie Forschende Punkte in Hunderten von Zellkernen per Auge zählen. Das ist mühsam, subjektiv und geschwindigkeitsbestimmend.

Cytely detektiert Foci pro Zellkern, misst deren Intensität und Fläche und verknüpft jeden Datenpunkt mit dem Bild. Gaten Sie nach Foci-Anzahl, klicken Sie auf einen Ausreißer und sehen Sie den tatsächlichen Zellkern.

So läuft der Assay ab

Zellkerne aus DAPI segmentieren → Foci im Schadensmarkerkanal detektieren → pro Zellkern zählen und messen. Für TAF/TIF: Spots im γH2AX- und Telomerkanal unabhängig detektieren, pro Zelle zählen, Kolokalisationsverhältnis berechnen.

Was Sie bereitstellen

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: γH2AX oder 53BP1 (IF)
  • Optional Ch3: Telomer-FISH-Sonde (für TAF/TIF)
  • Optional Ch4: zusätzlicher Schadensmarker

Was Sie erhalten

  • Foci-Anzahl pro Zellkern
  • Foci-Intensität
  • Foci-Fläche. Für TAF: Zweikanal-Foci-Kolokalisationsverhältnis pro Zelle
  • Anzahl der Mikronuklei (MNi) pro Zelle und % mikronukleierte Zellen (CBMN)

Einsatzbereit

γH2AX-Foci, 53BP1-Foci, RAD51-Foci, TAF/TIF (telomer-assoziierte Foci über zählbasierte Kolokalisation), zytoplasmatische Chromatinfragmente (CCF – siehe Seneszenz), Mikronukleus-/Mikronuklei-(MNi)-Zählung und der Zytokinese-Block-Mikronukleus-(CBMN)-Assay, nukleäre Knospen und nukleoplasmatische Brücken.

Für Unterstützung anfragen

Comet-Assay (andere Bildgebungsmodalität), Lebendzell-DNA-Schadenskinetik.

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