細菌感染は、細胞1つずつで勝負が決まる「数」のゲームです。どれだけの宿主細胞が感染し、それぞれどの程度の負荷を受けたのでしょうか？ 解析の実際の様子はこちら：https://youtube.com/watch?v=UEn5mqnrROk
細菌感染は、細胞1つずつで勝負が決まる「数」のゲームです。どれだけの宿主細胞が感染し、それぞれどの程度の負荷を受けたのでしょうか？
標準的なゲンタマイシン保護アッセイは、細胞外の細菌を殺滅することで細胞内と細胞外の細菌を区別します。有効な手法ですが、細胞ごとの分布を単一の数値に集約してしまいます。感染細胞の数を半減させる薬剤と、感染細胞1つあたりの細菌負荷を半減させる薬剤は、同じように見えてしまいます。しかし、両者の生物学はまったく異なります。
イメージングなら分布が保たれます。Cytelyは宿主細胞をセグメンテーションし、各宿主細胞内の細菌の総数として感染負荷を報告します。感染細胞の割合、負荷の分布、細胞ごとの検証結果が、すべて同じ画像から得られます。
これこそが、化合物、菌株、条件をランク付けするためにチームが本当に必要としている読み出しです。
アッセイの実行方法
宿主細胞をセグメンテーション → 細菌をサブオブジェクトとして検出 → 差次染色により内側か外側かを分類 → 細胞ごとに数、面積、強度を測定。
ご用意いただくもの
- Ch1: DAPI（宿主細胞の核）
- Ch2: 宿主細胞マーカー
- Ch3: 細菌標識（GFP / mCherry / IF / pHrodo）
- 任意のCh4: 内外の判別のための細胞外限定カウンター染色
得られるもの
- 宿主細胞あたりの細菌数
- 細胞ごとの細菌シグナルの総量
- 感染細胞の割合（%）
- 内在化した細菌と付着した細菌の割合（%）
すぐに実行可能
GFP/mCherry発現株、IF染色した固定細菌、pHrodo標識のライブ取り込み、内外差次免疫染色、ゲンタマイシン保護エンドポイント。
サポートについてはお問い合わせください
サブ秒解像度でのライブ細胞侵入動態、細胞内細菌複製の経時変化、分泌エフェクター転流アッセイ。