Nadie publica un artículo sobre la eficiencia de transfección. Nadie gana una subvención por ello. Pero cada experimento de CRISPR, cada estudio de sobreexpresión, cada producción de vectores virales…
Nadie publica un artículo sobre la eficiencia de transfección. Nadie gana una subvención por ello. Pero todos los experimentos de CRISPR, todos los estudios de sobreexpresión y todas las producciones de vectores virales dependen de ella. Si su transfección alcanzó un 5 % cuando necesitaba un 30 %, acaba de desperdiciar una semana de trabajo posterior y miles de dólares en reactivos.
Lo peor es que a menudo no se descubre hasta días después, cuando el experimento falla por motivos que se remontan a una transfección deficiente que nunca se comprobó. La solución es tremendamente sencilla: adquirir imágenes de la placa, contar las células positivas y calcular el porcentaje. Pero "tremendamente sencillo" sigue llevando tiempo cuando se evalúa a ojo en varios pocillos, y es aún peor cuando se necesitan tasas de doble positividad para la cotransfección.
Cytely le proporciona los porcentajes de células simples positivas y doble positivas en minutos. Cargue sus imágenes de DAPI + reportero, seleccione por intensidad y obtendrá una cifra concreta. Para plásmidos dobles, Cytely cruza la selección de ambos canales para indicarle exactamente cuántas células recibieron ambos constructos, la cifra que realmente importa para su experimento posterior.
Cómo se ejecuta el ensayo
Segmentar los núcleos a partir de DAPI → medir la intensidad del canal reportero por célula → clasificar transfectadas/no transfectadas mediante selección por intensidad. Para la cotransfección: seleccionar cada canal reportero para identificar poblaciones simples positivas y múltiples positivas.
Lo que usted aporta
- Ch1: DAPI
- Ch2: reportero fluorescente del plásmido A (p. ej., GFP)
- Ch3+: canales reporteros adicionales (p. ej., mCherry, BFP)
Lo que obtiene
- % de células transfectadas (simples positivas, doble positivas o múltiples positivas)
- Intensidad del reportero por célula
- Recuento celular total
Listo para ejecutar
Plásmido único, cotransfección multiplásmido (2 o más constructos), eficiencia de transducción viral, cualquier constructo reportero fluorescente.
Consúltenos para obtener soporte
Discriminación entre expresión transitoria y estable.