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En 1882, Élie Metchnikoff clavó una espina de rosa en una larva de estrella de mar y observó cómo las células acudían en masa para engullirla. Esa observación, la de células que se comen objetos extraños, se convirtió en uno de los fundamentos de la inmunidad innata y le ayudó a ganar el Premio Nobel en 1908.

Durante más de un siglo, la fagocitosis fue inmunología de manual. Importante, fundamental y ampliamente estudiada. Entonces la inmunooncología cambió las reglas del juego. Las células tumorales se protegen mostrando señales de "no me comas", la más conocida de ellas CD47. Una nueva generación de terapias, que incluye enfoques anti-CD47, anti-SIRPα y anti-CD24, pretende bloquear esas señales y permitir de nuevo que los macrófagos engullan las células cancerosas. De repente, uno de los mecanismos inmunitarios más antiguos se convirtió en una de las lecturas más candentes del descubrimiento de fármacos.

El ensayo es conceptualmente sencillo: mezclar fagocitos con presas marcadas con fluorescencia, adquirir imágenes y cuantificar la interacción. Pero el análisis es engañosamente difícil. La fagocitosis exige contar objetos discretos dentro de otros objetos: partículas presa asociadas a fagocitos. Un macrófago asociado a ocho bacterias es biológicamente muy distinto de uno asociado a una sola, pero un lector de placas puede informar de ambos simplemente como "positivos". La fluorescencia global reduce esa distribución a un único número y oculta la biología.

Cytely segmenta los fagocitos, detecta las partículas presa como subobjetos dentro de cada célula e informa del número de presas por fagocito. No una lectura binaria positivo/negativo, sino la distribución real a nivel de célula individual. En los ensayos en los que importa el estado de internalización, los colorantes sensibles al pH, como pHrodo, también pueden ayudar a distinguir las presas unidas a la superficie de las realmente internalizadas. La plataforma calcula además la multiplicidad de presa por imagen, o iMOP, para normalizar entre pocillos en los que la densidad de presas varió.

Cómo se ejecuta el ensayo

Segmentar los fagocitos → detectar las partículas presa → medir el número, el área y la intensidad de presas por fagocito. La internalización puede evaluarse mediante un colorante sensible al pH (p. ej., pHrodo, que fluoresce solo cuando se internaliza) o estimando el solapamiento 3D. iMOP proporciona una métrica de control para normalizar la actividad fagocítica frente a la disponibilidad de presas.

Lo que usted aporta

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: marcador de fagocitos o máscara celular
  • Ch3: presa marcada (p. ej., bacterias marcadas con pHrodo, esferas fluorescentes, sinaptosomas)

Lo que obtiene

  • Número de presas por fagocito
  • Área total de presas por célula
  • % de células positivas para fagocitosis
  • Intensidad de las presas por célula
  • Evaluación de la internalización (presas unidas a la superficie frente a internalizadas mediante marcador o estimación 3D)
  • Multiplicidad de presa por imagen (iMOP: proporción estimada de presas por célula en la muestra)

Listo para ejecutar

Fagocitosis por macrófagos, microglía, neutrófilos o monocitos/THP-1. Ingestión de esferas, bacterias o sinaptosomas, eferocitosis (eliminación de células apoptóticas marcadas), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP), cualquier ensayo con presa marcada. Evaluación de la internalización mediante colorantes sensibles al pH o estimación 3D.

Consúltenos para obtener soporte

Cinética de fagocitosis en célula viva, seguimiento de la maduración del fagosoma.

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