La entrada de NF-κB en el núcleo es uno de los eventos más estudiados en la biología de la inflamación. El transporte de YAP/TAZ es la lectura de la vía Hippo, crucial en el cáncer y la regeneración. La translocación de FOXO informa sobre la señalización de la insulina. Estas se encuentran entre las lecturas de vías de señalización más habituales en el descubrimiento de fármacos, y todas se reducen a un número: la relación de intensidad entre núcleo y citoplasma.

El reto técnico es definir dónde medir las intensidades. Primero se necesita una máscara del núcleo (a partir de DAPI), después una máscara citoplasmática y, por último, las mediciones de intensidad en ambas regiones. Es factible con herramientas de uso general, pero requiere configuración, scripts o la construcción de un flujo de análisis para cada nuevo experimento.

Cytely automatiza la generación de las máscaras: segmenta los núcleos y el citoplasma, resta los núcleos, mide la intensidad del canal diana en ambos compartimentos y calcula la relación. El resultado es una relación N/C por célula que puede representar frente a la dosis para construir curvas de translocación.

Cómo se ejecuta el ensayo

Segmentar los núcleos a partir de DAPI → dilatar para aproximar el límite celular → restar los núcleos para crear el anillo citoplasmático → medir la intensidad del canal diana en ambos compartimentos → calcular la relación.

Lo que usted aporta

  • Ch1: DAPI (tinción nuclear)
  • Ch2: proteína diana (IF o etiqueta fluorescente)

Lo que obtiene

  • Relación de intensidad núcleo/citoplasma (relación N/C) por célula
  • % de células con translocación por condición

Listo para ejecutar

YAP, NF-κB, FOXO, p65, STAT3, cualquier proteína de transporte núcleo/citoplasma.

Consúltenos para obtener soporte

Translocación específica de orgánulos (p. ej., de RE a Golgi).

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