El recuento de focos se trata como un problema de un solo canal. Un marcador, una condición, un recuento por célula. Eso responde solo una parte de la pregunta.
El recuento de focos suele tratarse como un problema de un solo canal. Un marcador, una condición, un recuento por célula. Eso responde solo a una parte de la pregunta.
La biología casi siempre implica más de un marcador. El daño en el ADN reúne γH2AX y 53BP1 en el mismo sitio. El estrés replicativo modifica la proporción entre orígenes licenciados y activos. La colocalización de dos focos señala un evento molecular específico que ninguno de los marcadores capta por sí solo.
El problema se complica rápidamente. Contar los focos por célula en el canal uno, contarlos en el canal dos y, después, determinar qué focos de cada canal se solapan, célula a célula, en miles de células y en múltiples condiciones. La mayoría de los flujos de análisis gestionan un canal y aproximan el resto.
En Cytely, cada canal se segmenta de forma independiente y los focos se detectan como objetos individuales. A continuación, la asociación se calcula por célula para tantos marcadores como requiera el experimento: recuentos individuales por canal, más cada combinación de focos que colocalizan. Comparar esos valores entre condiciones se convierte en un ejercicio estándar de selección (gating).
Cómo se ejecuta el ensayo
Segmentar las células → detectar los focos en Ch2 y Ch3 de forma independiente → contar cada tipo por célula y calcular las proporciones. Para determinar qué focos individuales del marcador A son positivos para el marcador B: detectar los puntos en Ch2 y medir la intensidad de Ch3 en esos puntos.
Lo que usted aporta
- Ch1: DAPI
- Ch2: marcador de focos A
- Ch3: marcador de focos B
Lo que obtiene
- Número de focos por canal y por célula
- Proporción del recuento del marcador A respecto al marcador B por célula
- % de células positivas para ambos marcadores
Listo para ejecutar
Focos de daño en el ADN asociados a telómeros (γH2AX + FISH de telómeros), asociación autofagosoma-mitocondria (LC3 + TOM20 para mitofagia), coexpresión por FISH de doble sonda (% de células que expresan el gen A y el gen B), PLA + marcador de tipo celular, cualquier comparación de puncta de dos canales.
Consúltenos para obtener soporte
Medición de la distancia espacial por punto entre dos conjuntos de puntos, asociación de puntos en 3D.