병소 계수는 흔히 단일 채널 문제로 취급됩니다. 하나의 마커, 하나의 조건, 세포별 계수 하나. 이것으로는 질문의 일부에만 답할 수 있습니다.

생물학적 현상에는 거의 항상 두 개 이상의 마커가 관여합니다. DNA 손상은 γH2AX와 53BP1을 같은 부위로 모읍니다. 복제 스트레스는 허가된 복제 기점과 활성 복제 기점의 비율을 바꿉니다. 두 병소의 공동국재화는 어느 한 마커만으로는 포착할 수 없는 특정 분자 사건을 나타냅니다.

문제는 빠르게 복잡해집니다. 채널 1에서 세포별 병소를 계수하고, 채널 2에서도 계수한 다음, 각 채널의 병소 중 어떤 것이 겹치는지를 세포별로, 수천 개의 세포에 걸쳐, 여러 조건에 걸쳐 판별해야 합니다. 대부분의 파이프라인은 한 채널만 처리하고 나머지는 근사치로 대신합니다.

Cytely에서는 각 채널을 독립적으로 분할하고 병소를 개별 객체로 검출합니다. 그런 다음 실험에 필요한 만큼의 마커에 걸쳐 세포별로 연관성을 계산합니다. 채널별 개별 계수와 함께 공동국재화된 병소의 모든 조합이 산출됩니다. 이 값들을 조건 간에 비교하는 작업은 표준적인 게이팅 작업이 됩니다.

어세이 실행 방식

세포 분할 → Ch2와 Ch3에서 병소를 독립적으로 검출 → 세포별 각 유형 계수 및 비율 계산. 마커 A의 개별 병소 중 어떤 것이 마커 B에 양성인지 판별하려면: Ch2에서 반점을 검출하고 해당 반점 내의 Ch3 강도를 측정.

제공하실 데이터

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: 병소 마커 A
  • Ch3: 병소 마커 B

제공되는 결과

  • 세포별 채널당 병소 수
  • 세포별 마커 A 대 마커 B의 계수 비율
  • 두 마커 모두 양성인 세포 비율(%)

바로 실행 가능

텔로미어 연관 DNA 손상 병소(γH2AX + 텔로미어 FISH), 자가포식소체-미토콘드리아 연관(미토파지를 위한 LC3 + TOM20), 이중 프로브 FISH 공동 발현(유전자 A와 유전자 B를 발현하는 세포 비율), PLA + 세포 유형 마커, 모든 이중 채널 반점 비교.

지원 문의

두 반점 세트 간 반점별 공간 거리 측정, 3D 반점 연관.

다중 마커 병소 연관 어세이 살펴보기 →