세포 주기를 분석하는 것은 증식과 질병을 이해하는 데 매우 중요합니다. 고처리량 방법은 공간 정보를 희생하는 반면, Cytely는 핵 염색만으로 형태학적 프로파일링을 활용하여 세포 주기 단계를 신속하게 분류할 수 있게 하며, 공간적 맥락을 보존하고 재현 가능한 정량화를 가능하게 합니다.
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세포 주기 분석: 형태 기반 분류를 통한 HeLa 세포의 세포 주기 단계
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HeLa 세포의 세포 주기 분석
이 애플리케이션 노트는 Cytely가 부착형 HeLa 세포에서 표준 핵 염색으로부터 도출한 형태학적 특징을 사용하여 세포 주기 단계를 분류하는 방법을 보여줍니다. 이 접근법은 자동 분할과 인터랙티브 게이팅을 결합하여 공간적 맥락을 보존하면서 순수한 유사분열 집단을 분리합니다.
이 노트에서 소개하는 주요 기능:
- 세포 집단 전반의 형태학적 이질성 시각화
- 핵 형태를 사용한 세포 주기 단계(G0/G1, S/G2, M) 식별
- 순차적 게이팅을 통한 고순도 유사분열 세포 분리 및 정량화
- 특수 염료 없이 수행하는 복합 세포 주기 분석, 후향적 분석 지원
실험 방법
HeLa 세포를 배양하고 표준 핵 염료로 염색했습니다. 형태를 보존하기 위해 부착 상태의 세포에서 이미징을 수행했습니다. Cytely는 자동 객체 검출(핵)과 형태학적 파라미터(예: 면적, 원형도, 장축/단축, 강도) 측정을 사용하여 이미지를 처리했습니다.
Cytely에서의 데이터 분석
- 업로드: Cytely의 웹 인터페이스를 통해 이미지를 추가했습니다.
- 분할: 핵을 자동으로 검출하고 형태와 강도를 측정했습니다.
- 순차적 산점도: 크기 및 강도 기반 대리 지표로 G0/G1, S/G2, 유사분열 집단을 분리했습니다.
- 유사분열 세포 분리: Major vs. Minor Axis Length에 대한 최종 게이트로 길쭉하게 늘어난 분열 중인 세포를 분리했습니다.
결과
공간적 맥락을 보존한 상태에서 형태에 따라 세 가지 주요 집단을 분류했습니다. 게이팅된 세포의 대표 크롭 이미지를 육안으로 검사하여 표현형을 확인했습니다. 데이터셋 전체의 정량화 결과:
- G0/G1: 65%
- S/G2: 23%
- 유사분열: 3%
- 기타: 9%
결론
Cytely는 세포 주기 분석을 빠르고 직관적인 워크플로로 바꿉니다. 자동 분할과 다중 파라미터 게이팅을 결합하여 표준 핵 염색만으로 세포 주기 단계를 정밀하게 정량화할 수 있습니다. 이 워크플로는 공간적 맥락을 보존하고 즉각적인 육안 확인을 제공하여 재현 가능하고 논문 게재 수준의 결과를 산출합니다.
- 복잡한 다중 염료 프로토콜 불필요
- 기존 데이터셋의 후향적 분석 가능
- 유세포 분석에서 손실되는 공간적 맥락 보존
- 게이팅된 집단의 즉각적인 육안 검증