宿主細胞内の寄生虫を数えることは、抗寄生虫薬の創薬における中核的な読み出しです。感染細胞の割合、細胞あたりの寄生虫数、寄生虫シグナル強度は、いずれも一つの… 解析の実際の様子はこちら：https://youtube.com/watch?v=1QrqcxTw4m4
宿主細胞内の寄生虫を計数することは、抗寄生虫創薬における中核的な読み出しです。感染細胞の割合、細胞あたりの寄生虫数、寄生虫シグナル強度のいずれも、最終的には1つの指標、すなわち細胞ごとの寄生虫負荷に集約されます。
技術的な課題は、どこで測定するかを定義することにあります。まず宿主の核をマスクし、次に細胞質のマスクを作成し、寄生虫のオブジェクトを検出し、寄生虫を各細胞に割り当て、そして各コンパートメントで数や強度を測定する必要があります。汎用ツールでも一般的には可能ですが、新しい実験のたびにマスキング、オブジェクトの割り当て、パイプラインの調整が必要になります。
Cytelyはこれを自動化します。宿主の核と細胞質をセグメンテーションし、寄生虫シグナルを検出して個々の細胞に割り当て、細胞ごとに寄生虫数と強度を測定し、細胞あたりの寄生虫の指標を算出します。出力は細胞ごとの寄生虫負荷であり、これを用量に対してプロットすることで感染／死滅曲線を作成できます。
アッセイの実行方法
細胞マーカーのチャネルから宿主細胞をセグメンテーション → 寄生虫チャネルで寄生虫を斑点またはオブジェクトとして検出 → 空間的な内包関係に基づいて寄生虫を宿主細胞に割り当て → 宿主細胞ごとに寄生虫負荷を計数・測定 → 寄生虫数の閾値により感染細胞と非感染細胞を分類。
ご用意いただくもの
- Ch1：DAPI（宿主および寄生虫の核）
- Ch2：宿主細胞マーカー（例：細胞体染色または細胞質のIF）
- Ch3：寄生虫特異的マーカー（例：抗寄生虫IF、GFP発現寄生虫、または病原体特異的染色）
得られるもの
- 条件ごとの感染細胞の割合（％）
- 宿主細胞あたりの寄生虫数
- 宿主細胞あたりの総寄生虫面積
- 細胞あたりの平均寄生虫強度
- 宿主細胞数
すぐに実行可能
細胞内原虫感染（例：Toxoplasma、Leishmania、Plasmodium、Trypanosoma）、蛍光標識またはGFP発現寄生虫、抗寄生虫IF染色、抗寄生虫化合物の薬剤スクリーニング、宿主-病原体の共染色パネル。
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生細胞での感染動態、寄生虫のライフサイクルステージ分類、細胞外寄生虫の運動性トラッキング。