全血中の細胞集団を解析することは、基本的でありながら困難な作業です。標準的な調製手順を経た後でも、サンプルには白血球・血小板・赤血球（RBC）が混在した集団が含まれていることがよくあります。Cytelyを使えば、研究者はこれらの集団を単一細胞レベルで迅速に特定・定量できます。散布図と直感的なゲーティングを通じて、さまざまな血液細胞タイプを、バイアスのないインタラクティブなワークフローで区別・特性評価できます。 本ノートで示す主な機能： 混在する細胞集団全体における不均一性の可視化 散布図を用いた集団（好中球・血小板・RBC）の特定 ゲーティングによる好中球サブセットの単離
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好中球調製物における混入細胞の同定
全血中の細胞集団を解析することは、基本的でありながら困難な作業です。標準的な調製ステップを経た後でも、試料には白血球、血小板、赤血球（RBC）が混在した集団が含まれることが少なくありません。Cytelyを使えば、研究者はこれらの集団を単一細胞レベルで迅速に同定し、定量することができます。散布図と直感的なゲーティングを通じて、さまざまな血球種を偏りのないインタラクティブなワークフローの中で識別・特性評価できます。
本ノートで示す主な機能:
- 混合細胞集団にわたる不均一性の可視化
- 散布図を用いた集団（好中球、血小板、RBC）の同定
- 好中球サブセットを分離するためのゲーティング
実験方法
採血と好中球の分離
健常なボランティアから、翼状針を用いた静脈穿刺によって末梢血を採取し、クエン酸ナトリウム抗凝固剤入りチューブに回収しました。好中球は、Ficoll-Paque（GE Healthcare）を用いた密度勾配遠心分離により、メーカーの指示に従って分離しました。
細胞の取り扱いと染色
分離した好中球をHepes緩衝生理食塩水（HBS）（20 mM Hepes、150 mM NaCl、2 mM CaCl₂、1 mM MgCl₂、pH 7.4）に再懸濁し、使用まで氷上で維持しました。
蛍光標識のため、細胞を室温・遮光下で30分間、以下と共にインキュベートしました:
- CellMask™ Green Plasma Membrane Stain（2 µM、Thermo Fisher Scientific）
- CellTracker™ Deep Red（1 µM、Thermo Fisher Scientific）
- Hoechst 33342 核染色（5 µg/mL）
スライドの調製
全血細胞をPBSに再懸濁し、Ibidi 8ウェルチャンバースライド（Ibidi GmbH）に播種して、Cytelyでのイメージングとそれに続く解析に供しました。
Cytelyでのデータ解析
データセットは、Cytelyのドラッグ＆ドロップインターフェースを用いて解析しました。
- アップロード: 画像はCytelyのウェブインターフェースから直接アップロードしました。
- セグメンテーション: 核と細胞質の自動検出。
- 特徴抽出: 形態および強度に関するパラメータ（サイズ、形状、チャネル強度）を細胞ごとに計算しました。
- 散布図: 前方散乱の代替指標（サイズ、形態）を強度値に対してプロットすることで、主要な集団を分離しました（図1）。
- ゲーティング: 好中球、RBC、血小板を散乱特性に基づいて同定しました（図1）。
- 好中球: より大きく、多分葉の核、強い細胞質シグナル
- 血小板: 非常に小さく、膜および核のシグナルが弱い
- RBC: 無核、強い膜シグナル、Hoechstシグナルはほとんどまたは皆無
- 統計: 好中球を分離し、その集団から関連するパラメータを抽出しました（図2）。
結果と考察
- 混入細胞の同定: RBCと血小板は好中球から明確に分離されました（図1）。
- 精製の結果: 単純な逐次ゲートによって混入細胞を除外し、クリーンな好中球データセットが得られました（図2）。
- 実用的なインパクト: Cytelyは、追加のアッセイを必要とせずに、純度のリアルタイム評価と混入細胞の定量を可能にします。
結論
Cytelyは、多様な細胞集団を高速かつ直感的に、そして明確に評価できるようにすることで、血球解析を一変させます。 自動セグメンテーションと散乱ベースのゲーティングという強力な組み合わせは、混入画分を高精度で定量するだけでなく、精製されたサブセットを即座に視覚的に確認できるようにします。しかもそのすべてが、単一の合理化されたワークフロー内で完結します。Cytelyを使えば、通常は複数の下流アッセイを要する作業が、労力のかからない単一のステップに集約され、比類のない明瞭さと信頼性を備えた、再現性が高く出版に耐えるデータが得られます。