1882年、イリヤ・メチニコフ（Élie Metchnikoff）はヒトデの幼生にバラのトゲを刺し、細胞が群がってそれを飲み込む様子を観察しました。細胞が異物を食べるというこの観察は、自然免疫の基礎となり… 解析の実際の様子はこちら：https://youtube.com/watch?v=ezaikU7ix1I
1882年、イリヤ・メチニコフ（Élie Metchnikoff）はヒトデの幼生にバラのトゲを刺し、細胞が群がってそれを飲み込む様子を観察しました。細胞が異物を食べるというこの観察は自然免疫の基礎となり、1908年のノーベル賞受賞にもつながりました。
1世紀以上にわたり、食作用は教科書的な免疫学のテーマでした。重要かつ基礎的で、広く研究されてきました。そこへ免疫腫瘍学が登場し、状況が一変します。腫瘍細胞は「私を食べないで（don't eat me）」シグナルを提示することで自らを守っており、その代表例がCD47です。抗CD47、抗SIRPα、抗CD24などの新世代の治療法は、これらのシグナルを遮断し、マクロファージががん細胞を貪食できるようにすることを目指しています。こうして、教科書に載る最も古い免疫機構の一つが、創薬において最も注目される読み出しの一つとなったのです。
アッセイの概念はシンプルです。貪食細胞と蛍光標識した標的粒子を混ぜ、イメージングし、その相互作用を定量します。しかし、解析は見た目以上に困難です。食作用の解析では、オブジェクト内の個別のオブジェクト、つまり貪食細胞に関連した標的粒子をカウントする必要があります。8個の細菌と関連したマクロファージと1個の細菌と関連したマクロファージは生物学的に大きく異なりますが、プレートリーダーではどちらも単に「陽性」と報告される場合があります。バルクの蛍光測定はその分布を単一の数値に集約し、生物学を覆い隠してしまいます。
Cytelyは貪食細胞をセグメンテーションし、各細胞内のサブオブジェクトとして標的粒子を検出して、貪食細胞ごとの標的粒子数を報告します。陽性/陰性の二値ではなく、実際の単一細胞レベルの分布が得られます。内在化の状態が重要なアッセイでは、pHrodoなどのpH感受性色素を用いることで、表面に結合した標的粒子と実際に内在化した標的粒子を区別しやすくなります。さらに、標的粒子の画像多重度（iMOP）を算出し、標的粒子密度がばらついたウェル間で正規化することもできます。
アッセイの実行方法
貪食細胞をセグメンテーション → 標的粒子を検出 → 貪食細胞ごとに標的の数、面積、強度を測定。内在化は、pH感受性色素(例: 内在化時にのみ蛍光を発するpHrodo)を用いて、または3次元オーバーラップの推定によりスコア化できます。iMOPは、標的の利用可能性に対して貪食活性を正規化するための対照指標を提供します。
ご用意いただくもの
- Ch1: DAPI
- Ch2: 貪食細胞マーカーまたは細胞マスク
- Ch3: 標識した標的粒子（例：pHrodo標識細菌、蛍光ビーズ、シナプトソーム）
得られるもの
- 貪食細胞ごとの標的粒子数
- 細胞ごとの標的粒子総面積
- 食作用陽性細胞の割合（%）
- 細胞ごとの標的粒子強度
- 内在化スコアリング（マーカーまたは3D推定による、表面結合標的粒子と内在化標的粒子の区別）
- 標的粒子の画像多重度（iMOP — サンプル中の標的粒子対細胞比の推定値）
すぐに実行可能
マクロファージ、ミクログリア、好中球、または単球/THP-1の貪食。ビーズベース、細菌、シナプトソームの取り込み、エフェロサイトーシス(標識アポトーシス細胞のクリアランス)、抗体依存性細胞貪食(ADCP)、任意の標識標的アッセイ。pH感受性色素または3次元推定による内在化スコア化。
サポートについてはお問い合わせください
ライブ細胞での貪食動態、ファゴソーム成熟のトラッキング。