サンプルデータセットを見る →

1998年、Rogakou、Pilch、Orr、Bonnerは、DNA二本鎖切断が生じるたびにヒストンH2AXのリン酸化が誘発され、損傷部位に目に見えるフォーカスが形成されることを発見しました。1つのフォーカスが1つの切断に対応します。現在でも既知の中で最も高感度なDNA損傷マーカーであり、ミリグレイ単位の損傷まで検出でき、コメットアッセイより桁違いに高感度です。

それにもかかわらず、フォーサイのカウントは今なお大部分が手作業です。論文では、研究者が数百個の核の中のドットを目視でカウントしたと記述されることが珍しくありません。これは退屈で主観的であり、研究の律速段階となっています。

Cytelyは核ごとにフォーサイを検出し、その強度と面積を測定して、すべてのデータポイントを画像にリンクします。フォーサイ数でゲーティングし、外れ値をクリックすれば、実際の核を確認できます。

アッセイの実行方法

DAPIから核をセグメンテーション → 損傷マーカーチャネルでフォーサイを検出 → 核ごとにカウントし測定。TAF/TIFについては、γH2AXとテロメアの両チャネルで独立にスポットを検出し、細胞ごとにカウントして共局在比を計算。

ご用意いただくもの

  • Ch1: DAPI
  • Ch2: γH2AXまたは53BP1（IF）
  • 任意のCh3: テロメアFISHプローブ（TAF/TIF用）
  • 任意のCh4: 追加の損傷マーカー

得られるもの

  • 核ごとのフォーサイ数
  • フォーサイの強度
  • フォーサイの面積。TAFの場合：細胞ごとの2チャネル間フォーサイ共局在比
  • 細胞ごとの微小核（MNi）数と微小核形成細胞の割合（CBMN）

すぐに実行可能

γH2AXフォーサイ、53BP1フォーサイ、RAD51フォーサイ、TAF/TIF(カウントベースの共局在によるテロメア関連フォーサイ)、細胞質クロマチン断片(CCF — 細胞老化を参照)、小核(MNi)のカウントおよびサイトカイネシスブロック小核(CBMN)アッセイ、核出芽および核質橋。

サポートについてはお問い合わせください

コメットアッセイ(異なるイメージングモダリティ)、ライブ細胞DNA損傷動態。

DNA Damage & Genotoxicity (Foci) アッセイを見る →